【日水培養基】控制菌檢查用培養基適用性檢查
發布時間：
2022-11-16
作者：
適用性檢查試驗菌株
大腸埃希菌［CMCC(B)44102］
金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26003］
銅綠假單胞菌［CMCC(B)10104］
乙型副傷寒沙門菌［CMCC(B)50094］
白色念珠菌［CMCC(F)98001］
枯草芽孢桿菌［CMCC(B)63501］
菌株培養基菌液制備同微生物限度檢查方法驗證。
各種培養基需要測試的能力及判斷指標
液體培養基促生長能力檢查：取不大于100CFU的試驗菌株分別接種于被檢培養基和對照培養基中，在相應控制菌檢查規定的培養溫度（30~35℃）及最短培養時間下培養。與對照培養基比較，被檢培養基中試驗菌應生長良好，表現為液體培養基變渾濁。
固體培養基促生長能力檢查：取試驗菌液0.1ml（含菌數50~100CFU）分別涂布于被檢培養基和對照培養基上，在相應控制菌檢查規定的培養溫度（30~35℃）及最短培養時間下培養。與對照培養基比較，被檢培養基與對照培養基上生長的菌落大小、形態特征應一致。
液體培養基指示能力檢查：取不大于100CFU的試驗菌株分別接種于被檢培養基和對照培養基中，在相應控制菌檢查規定的培養溫度（30~35℃）及最短培養時間下培養。與對照培養基管比較，被檢培養基中試驗菌應生長情況/指示劑反應等應與對照培養基一致。
固體培養基指示能力檢查：取試驗菌液0.1ml（含菌數50~100CFU）分別涂布于被檢培養基和對照培養基上，在相應控制菌檢查規定的培養溫度（30~35℃）及最短培養時間下培養。被檢培養基上試驗菌的菌落形態特征、菌落顏色及指示劑反應情況應與對照培養基一致。
培養基抑制能力檢查：取不大于100CFU的試驗菌株分別接種于液體被檢培養基和對照培養基，取試驗菌液0.1ml（不大于100CFU）分別涂布于固體被檢培養基和對照培養基，在相應控制菌檢查規定的培養溫度（30~35℃）及最長培養時間下培養。試驗菌應不得生長。
控制菌檢查用培養基能力測試列表
控制菌檢查涉及的21種培養基，特點各異。表格中概述培養基檢查的具體項目，具體操作程序在其后說明。
控制菌檢查用培養基適用性檢查項目、菌株及判斷指標
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各控制菌檢查用培養基適用性檢查實驗操作
控制菌檢查用培養基較多，特點各不相同。為避免培養基配制過程出現遺漏，此處特別提示以下幾個需要特殊注意的培養基：
不可高壓滅菌只能加熱煮沸的培養基3種：DHL瓊脂、SS瓊脂和念球菌顯色培養基；
需添加試劑的培養基3種：TTB培養基、亞碲酸鹽肉湯培養基和哥倫比亞瓊脂培養基。
各培養基適用性檢查的具體操作過程
1 膽鹽乳糖培養基
新鮮配制100ml/瓶的對照膽鹽乳糖培養基4瓶，121℃滅菌15min，備用。分別接種大腸埃希菌、銅綠假單胞菌以及金黃色葡萄球菌各1瓶，接種菌液量1ml(不大于100CFU),另一瓶不接種菌作為空白對照；被檢培養基同法操作，置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較，被檢培養基中試驗菌應生長良好，表現為液體培養基變渾濁；培養48h，空白培養瓶和接種金黃色葡萄球菌的培養瓶應不得渾濁；
2 MUG培養基
新鮮配制50ml/瓶的對照MUG培養基4瓶，121℃滅菌15min,備用。接種大腸埃希菌2支，接種菌液0.2ml(不大于100CFU)，另一支不接種菌作為空白對照，培養5h，在366nm紫外光燈下觀察結果；被檢培養基同法操作，置規定溫度培養。空白培養基應不得渾濁，且366nm處觀察無熒光；與對照培養基比較，被檢培養基中試驗菌應生長良好，表現為液體培養基變渾濁，366nm處應呈熒光。若熒光不明顯，則可延長至24h觀察。
3 曙紅亞甲藍瓊脂培養基（EMB）
新鮮配制對照EMB瓊脂培養基，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養箱預培養8h后備用。取5個無菌EMB瓊脂平板，分別涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌各2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置培養；被檢培養基同法操作。培養18h，被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致；培養24h，空白平板應無菌落生長。
4 麥康凱瓊脂培養基
新鮮配制對照麥康凱瓊脂培養基121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養箱預培養8h后備用。取5個無菌麥康凱瓊脂平板，分別涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌各5皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置培養；被檢培養基同法操作。培養18h，被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致；培養24h，空白平板應無菌落生長。
新鮮配制10ml/支的對照乳糖膽鹽發酵培養基，121℃滅菌15min，備用。取5支，分別接種大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌，各2支，接種菌液量1ml(不大于100CFU)，另一支不接種菌作為空白對照；被檢培養基同法操作，置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較，被檢培養基中試驗菌應生長良好，表現為液體培養基變色、渾濁，且有導管中應有明顯的產氣現象；培養24h，空白培養管和接種金黃色葡萄球菌的培養管應不得變色、不得渾濁。
6 乳糖發酵培養基
新鮮配制10ml/支的對照乳糖發酵培養基，121℃滅菌15min，備用。取3支，接種大腸埃希菌2支，接種菌液量1ml(不大于100CFU)，另一支不接種菌作為空白對照；被檢培養基同法操作，置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較，被檢培養基中試驗菌應生長良好，表現為液體培養基變色、渾濁，且有導管中應有明顯的產氣現象；培養24h，空白培養管應不得變色、不得渾濁。
7 營養肉湯培養基
新鮮配制100ml/瓶的對照營養肉湯培養基3瓶，121℃滅菌15min，備用。分別接種乙型副傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌各1瓶，接種菌液量1ml(不大于100CFU)，另一瓶不接種菌作為空白對照；被檢培養基同法操作，置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較，被檢培養基中試驗菌應生長良好，表現為液體培養基變渾濁；培養48h，空白培養瓶應不得渾濁。
8 四硫磺酸鈉亮綠培養基（TTB）
新鮮配制10ml/支的對照四硫磺酸鈉亮綠培養基基礎，121℃滅菌15min，備用。臨用前，無菌操作加入0.2ml碘試液和0.1ml亮綠試液。取5支，分別接種乙型副傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌各2支，接種菌液1ml(不大于100CFU)，另一支不接種菌作為空白對照；被檢培養基同法操作，置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較，被檢培養基中試驗菌應生長良好，表現為液體培養基上清渾濁；培養24h，空白培養管和接種金黃色葡萄球菌的培養管應不得渾濁。
由于TTB中的碳酸鈣對渾濁現象觀察有影響，因此若渾濁現象不明顯，則將各培養物接種至膽鹽硫乳瓊脂（DHL）或沙門、志賀屬瓊脂（SS）平板上劃線觀察TTB培養物生長情況，空白對照和接種金黃色葡萄球菌的培養管劃線后應無菌落生長，對照和被檢TTB培養基劃線接種至瓊脂平板后應有菌落生長、且顏色形態一致。
9 膽鹽硫乳瓊脂培養基（DHL）
新鮮配制對照DHL瓊脂培養基，加熱充分溶解，冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養箱預培8h后備用。取3個無菌DHL瓊脂平板，涂布接種乙型副傷寒沙門菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置培養；被檢培養基同法操作。培養18h，被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致；培養48h，空白平板應無菌落生長。
10 沙門、志賀屬瓊脂培養基（SS）
新鮮配制對照SS 瓊脂培養基，加熱充分溶解，冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養箱預培8h后備用。取3個無菌SS 瓊脂平板，涂布接種乙型副傷寒沙門菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置培養；被檢培養基同法操作。培養18h，被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致；培養48h，空白平板應無菌落生長。
11 溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基基礎
新鮮配制對照溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養箱預培8h后備用。取7個無菌瓊脂平板，分別涂布接種銅綠假單胞菌和大腸埃希菌各3皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置培養；被檢培養基同法操作。培養18h，被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致；培養24h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應無菌落生長。
12 綠膿菌素測定用培養基（PDP）
新鮮配制對照綠膿菌素測定用培養基基礎，每升培養基中加入10ml甘油，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養箱預培8h后備用。取3個無菌綠膿菌素測定用瓊脂平板，涂布接種銅綠假單胞菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置培養24h；被檢培養基同法操作。空白平板應無菌落生長，被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致。
13 亞碲酸鹽肉湯培養基
新鮮配制100ml/瓶的對照營養肉湯培養基3瓶，121℃滅菌15min，備用。臨用前，加入新鮮配制的無菌1%亞碲酸鹽0.2ml。分別接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各1瓶，接種菌液1ml(不大于100CFU)，另一瓶不接種菌株作為空白對照；被檢培養基同法操作，置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較，被檢培養基中試驗菌應生長良好，表現為液體培養基變黑、變渾濁；培養48h，空白培養瓶和接種大腸埃希菌的培養瓶應不得渾濁。
14 卵黃氯化鈉瓊脂培養基
新鮮配制對照卵黃氯化鈉瓊脂培養基基礎，121℃滅菌15min,冷卻至60℃，參照2010版《中國藥典》比例無菌操作加入10%氯化鈉卵黃液，充分振搖后傾注平皿，35℃培養箱預培8h后備用。取5個無菌瓊脂平板，分別涂布接金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置；被檢培養基同法操作。培養24h，被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致；培養72h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應無菌落生長。
15 甘露醇氯化鈉瓊脂培養基
新鮮配制對照甘露醇氯化鈉瓊脂培養基，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養箱預培8h后備用。取5個無菌瓊脂平板，分別涂布接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置；被檢培養基同法操作。培養24h，被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致；培養72h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應無菌落生長。
16 梭菌增菌培養基
新鮮配制100ml/瓶的對照梭菌增菌培養基2瓶，121℃滅菌15min，備用。接種生孢梭菌1瓶，接種菌液1ml(不大于100CFU)，另一瓶不接種菌株作為空白對照，置規定溫度的厭氧條件培養48h；被檢培養基同法操作。空白培養瓶應不得渾濁；與對照培養基比較，被檢培養基中試驗菌應生長良好，表現為液體培養基變渾濁。
17 哥倫比亞瓊脂培養基
新鮮配制對照哥倫比亞瓊脂培養基，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養箱預培8h后備用。取3個哥倫比亞瓊脂平板，涂布接種生孢梭菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后置規定溫度的厭氧條件下倒置培養；被檢培養基同法操作。培養48h，空白平板無菌落生長；被檢培養基菌落大小、形態特征應與對照培養基上的菌落一致。
哥倫比亞瓊脂培養基營養豐富，適宜多數需氧菌的生長，為了消除其它雜菌生長對檢查結果的影響，可在每升滅菌后培養基中按無菌操作添加含有相當于20mg慶大霉素的硫酸慶大霉素。添加慶大霉素的哥倫比亞瓊脂可參照上述方法進行培養基適用性考察。
18 沙氏葡萄糖肉湯培養基
新鮮配制100ml/瓶的對照沙氏葡萄糖肉湯培養基2瓶，121℃滅菌15min，備用。接種白色念球菌1瓶，接種菌液量1ml(不大于100CFU)，另一瓶不接種菌作為空白對照；被檢培養基同法操作，置規定溫度培養。培養48h,與對照培養基比較，被檢培養基中試驗菌應生長良好，表現為液體培養基變渾濁；培養72h，空白培養瓶應不得渾濁。
19 沙氏葡萄糖瓊脂培養基
新鮮配制對照沙氏葡萄糖瓊脂培養基，121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養箱預培8h后備用。取3個沙氏葡萄糖瓊脂平板，涂布接種白色念球菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置培養；被檢培養基同法操作。培養24h，被檢培養基上的菌落大小、形態特征、顏色及氣味應與對照培養基上的菌落一致；培養72h，空白平板應無菌落生長。
20 念球菌顯色培養基
新鮮配制對照念球菌顯色培養基，加熱充分溶解，冷卻至60℃傾注平皿，35℃培養箱預培8h后備用。念球菌顯色平板使用前避光保存，取5個無菌念球菌顯色平板，分別涂布接種白色念球菌和大腸埃希菌各2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置培養；被檢培養基同法操作。培養24h，被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致；培養72h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應無菌落生長。
21 1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養基
新鮮配制對照1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養基基礎，每升培養基中加入10ml聚山梨酯80，121℃滅菌15min,冷卻至60℃后，傾注平皿， 35℃培養箱預培8h后備用。取3個1%聚山梨酯80-玉米瓊脂平板，涂布接種白色念球菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50~100CFU），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規定溫度倒置培養；被檢培養基同法操作。培養24h，被檢培養基菌落大小、形態特征及芽管指示能力應與對照培養基上的菌落一致；培養48h，空白平板應無菌落生長。
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